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蛋白测序仪的工作原理及用途

作者: ABI 更新于:2015-03-03 浏览:2216

主要用途:测量蛋白质或多肽一级结构的氨基酸序列应用于生物、化学、医学等领域的结构分析结构预测,药物设计等。适于各种方法制备蛋白样品的N-端测序,包括电转移印迹法、PVDF膜上样品或HPLC等溶液样品。灵敏度可达fmol级样品,独立的高精度HPLC系统分析PTH氨基酸。

蛋白测序仪的工作原理:蛋白质N末端测序采用Edman降解法,在碱性条件下蛋白质的自由α-氨基与PITC偶联后,与之毗邻的第二残基的肽键大为削弱,在无水三氟乙酸的作用下发生特异性断裂,生成ATZ氨基酸,毗邻的第二个残基的α-氨基再与PITC反应,如此循环往复地进行偶联→降解→偶联→降解反应。ATZ氨基酸在转化器内异构化为更稳定的PTH氨基酸,经HPLC在线检测,结合标准品的洗脱曲线判定氨基酸的种类。释放的PTH氨基酸由HPLC在线定量检测(269nm)。可以测定50~60个氨基酸残基。

蛋白测序仪的主要用途:测量蛋白质或多肽一级结构的氨基酸序列应用于生物、化学、医学等领域的结构分析结构预测,药物设计等,适用于各种方法制备蛋白样品的N-端测序,包括电转移印迹法、PVDF膜上样品或HPLC等溶液样品。灵敏度可达fmol级样品,独立的高精度HPLC系统分析PTH氨基酸。

注意事项:

1.样品信息包括:样品编号、样品数量、样品量、浓度、蛋白质或多肽、样品纯度、溶剂种类。  

2.样品N端未被封闭,不含干扰物质:去污剂、胺、盐分、氨基酸、非挥发性缓冲液、蛋白酶。  

3.样品形式:好是冻干粉或溶解于纯水的蛋白溶液。  

4.样品如被修饰,请详细告知修饰方式。提供样品组织来源及制备方法信息。  

5.样品如有特殊理化性质(如膜蛋白,特殊酶活性,特殊结构等),请详细说明。  

6. 样品纯度应达到95%以上(HPLC),标明准确纯度。纯度越高,实验结果越理想。  

7.样品浓度不低于5 pmol/μl(5 uM), 体积不少于50μl, 并标明准确浓度。  

8.请务必标明样品缓冲液的成份,并保证样品缓冲液中不含蛋白酶。

详情请咨询021-51083677

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