尿沉渣分析仪问答
同舸品牌馆
2012-06-07点击量：
1.为什么要采用尿沉渣计数板？
答：尿沉渣的量和压(涂)片厚度是标准化重要环节，在普通玻片上随意滴加沉渣液或加盖玻片(甚至不加盖玻片)，不能提供标准化的结果。建议使用标准化的沉渣计数板。
2.尿沉渣的检查内容应包括哪些？
答：《尿沉渣检查标准化的建议(讨论稿)》中规定尿沉渣的检查内容应包括：
A. 细胞：红细胞、白细胞、吞噬细胞、上皮细胞(包括肾小管上皮细胞、移行上皮细胞、鳞状上皮细胞)、异型细胞等。
B. 管型：透明管型、细胞管型、颗粒管型、蜡样管型、脂肪管型、混合管型、宽形管型等。
C. 结晶：磷酸盐、草酸钙、尿酸结晶和药物结晶等。
D. 细菌、寄生虫(或虫卵)、真菌、精子、粘液等。
E. 临床医生特殊要求的其他成分。
3.干化学尿分析是怎样测定白细胞的？
答：干化学法检查尿内白细胞的原理，是基于粒细胞浆内含有酯酶，能水解试剂带膜块中的吲哚酚酯生成吲哚酚和有机酸，进一步氧化而显色，颜色的深浅与白细胞含量的多少成正比。
高比重尿、维生素C、高葡萄糖尿、清蛋白、淋巴细胞尿、头孢菌素可造成测定结果的假阴性。
4.干化学尿分析是怎样测红细胞的？
答：红细胞、血红蛋白及肌红蛋白具有类似过氧化物酶的作用，将无色的底物氧化为有色化合物。
某些氧化物如漂白粉等可导致假阳性反应。尿路感染，由于细菌产生过氧化物酶也会引起假阳性。
尿液中大量维生素C的存在而产生还原作用，可抑制试验氧化作用，引起假阴性。甲醛也会使试验敏感性降低或呈假阴性。
5.为什么说干化学尿分析只能用于“过筛”？
答：如前所述，干化学测定尿液中白细胞、红细胞都属于间接测量，容易受到各种因素干扰，出现各种假阴性、假阳性报告。
不同厂家、不同型号的试剂带敏感度不一样，而且还有批间误差的影响。
6.尿沉渣分析仪分成哪几类？
答：尽管近年来在尿沉渣检查中发展了一些新的方法(例如用单克隆抗体识别各种细胞)，但就商品化的尿沉渣分析仪而言，按测量原理分类，目前只分成镜检图像式和流式细胞法两类。
在镜检图像式尿沉渣分析仪中按测量池的不同，又可分为一次性标准定量板式和流动池式两种。
7.尿沉渣分析仪发展情况如何？
答：经典的尿沉渣显微镜检查已伴随检验界渡过了漫长岁月，至今仍是直接权威的方法。尿沉渣分析仪的历史还是短暂的，新产品正在不断涌现。
1988年，美国国际遥控图像系统公司研制成功世界上台摄像式尿沉渣分析仪，由检验人员在计算机显示屏上鉴别细胞。
答：这种尿沉渣分析仪应用了流式细胞和电阻抗原理：当尿标本被稀释并染色后，靠液压作用通过鞘液流动池，它被无粒子颗粒的鞘液包围，使每个细胞以单个纵列的形式通过流动池的中心轴线，并被氩激光光束照射。仪器将每个细胞发出的荧光、散射光和电阻抗信号转变成电信号。根据每个尿液标本的直方图和散射图来区分细胞及其形态。
答：流式细胞法尿沉渣分析仪是目前自动化程度高、分析速度快的尿沉渣仪(每个样品约需72秒钟)。然而，它也存在着明显不足之处：
- 无法区分小圆上皮细胞的类别(如肾小管上皮细胞、中层和底层移行上皮细胞等)，必须离心染色镜检才能区分；
- 只能检测出透明管型和标出有病理管型的存在可能，只有通过离心镜检，才能确认是那一类管型；
- 仪器对酵母细胞、精子细胞和结晶有标记时都应离心镜检，才能真正区分；
- 不能提供尿沉渣的真实形态图，而是散射图和直方图。
所以，专家们的共识是：干化学尿液分析仪、流式细胞法尿沉渣分析仪等均只能作为尿液分析的筛选手段，而只有显微镜检查是终的。
- 仪器价格昂贵，而且日常使用成本也过高，试剂成本过高；
- 仪器的使用、维护较复杂；
- 容易发生交叉污染、阻塞等现象。
流式细胞法尿沉渣分析仪适用于标本量非常大的医院，作为尿沉渣筛选检查设备，对有疑问的标本进一步进行显微镜检查是不可避免的。
10.流动池式尿沉渣分析仪如何工作？
答：流动池式尿沉渣分析仪目前市场上有两类：一类是定量的，流动池内有计数格；另一类为非定量，流动池内无计数格，故无法满足尿沉渣定量检查标准的要求。 流动池式定量尿沉渣分析仪一般由流动计数池、定量加样器、显微镜、计算机、干化学尿分析仪构成。用蠕动泵自动吸入定量尿液，流动计数池刻有4个大方格(容积为0.25μl /大格)，每个大方格又分成25小方格(容积为0.01μl /小格)。通过人工操作显微镜观察标本，计数分型完毕，自动冲洗标本。
11.流动池式尿沉渣分析仪有何特点？
答：流动池式尿沉渣分析仪的优点是基于可靠的显微镜观察和自动进样、自动冲洗。其缺点是：
- 测试速度太慢：进样时需吸入时间和稳定时间，如果反复冲洗不净的话还要长 时间浸泡，而人工操作显微镜不仅缓慢而且工作强度大；
- 操作难以规范化，受人为因素影响，同一标本往往因观察者不同而结果不同，即使同一观察者也会因两次观察路径不同而结果不同；
- 存在不可避免的交叉污染，这是流动池式仪器的通病；
- 容易发生阻塞，连接部的死区造成污垢的积累；
- 如果对标本染色就会污染流动池，导致无法冲洗干净。
12.选购流动池式尿沉渣分析仪时应注意什么？
答：目前市场上流动池式尿沉渣分析仪会出现以下一些问题：
- 非定量流动池上没有定量刻度，当然也就无法以XX/μl报告；
- 流动池内腔厚度未经常化计量，无法保证被测样品的体积精度；
- 流动池内腔过厚，细胞无法在同一焦平面上观察到，并且样品漂移容易发生漏检；
- 片面强调染色，造成流动池污染。
13.镜检时如何才能克服尿沉渣标本的非均匀性？
答：尿沉渣标本的显著特征就是非均匀性。为了克服标本非均匀性对测试结果的影响，镜检时要做到两条：
- 保证不少于小观察体积；
- 严格按规定路径进行观察。
14.什么叫自动显微平台技术？
答：所谓自动显微平台技术是指显微镜的载物平台(X、Y轴方向)的运动、聚焦(Z轴方向)、物镜的切换、光源的强弱等等都受控于计算机。也就是说，只要通过鼠标、控制器、甚至网上传来的控制命令，显微镜就能按照人们的意愿动作起来。普利生AMP2000型自动显微平台的扫描精度达1微米。因此，该技术具有广阔的应用前景，目前已成功应用于病理远程全景同步会诊、尿沉渣自动扫描等领域。
15.用于离心尿液的离心管有何要求？
答：《尿沉渣检查标准化的建议(讨论稿)》中规定：“应具备以下条件：清洁、透明、带刻度，刻度应至少标明10ml、1ml、0.2ml，容积应12ml，试管底部呈锥形或缩窄形。试管口应尽可能具有密封装置，好使用不易破碎一次性塑料或玻璃离心管。”
16.尿沉渣专用离心管有何特点？
答：目前，定量尿沉渣检查普遍采用的一种专用离心管，管壁有刻度，可盛放10ml尿液。管的底部有一个0.2ml的突出部分，在倒去离心后的上清液时，利用液面的表面张力将0.2ml的尿沉渣样品留在这里面。也就是说很方便地获得了浓缩50倍的标本。
17.是不是任何标本都必须浓缩50倍？
答：这是一种误解。一般标本浓缩50倍后，可提高检测率，减少观察体积。对于那些明显混浊的标本，可以不浓缩，以免浓缩后又要稀释，稀释过程很容易引入测量误差。计算数据时要考虑到浓缩与不浓缩的区别。
18.对于离心机有何要求？
答：《尿沉渣检查标准化的建议(讨论稿)》中规定：“采用水平式离心机，离心时应盖上盖，以保证安全。离心时，机内温度应尽可能保持<25°C，离心机相对离心力应在400xg左右。
离心机转速与相对离心力的换算公式为：
g = 11.8 x ( rpm/1000 )2 x R
或 rpm = 1000 x ( 500/11.8 x R )1/2
注：rpm为每分钟转数
R为半径，指从离心机轴中央到离心管底部的距离
g为相对离心力
例如：水平式离心机半径为20cm时，采用1338r/min(或1350r/min)
水平式离心机半径为16cm时，采用1495r/min(或1500r/min)
水平式离心机半径为10cm时，采用1892r/min(或1900r/min)
19.对显微镜有何要求？
答：《尿沉渣检查标准化的建议(讨论稿)》中建议：“尿沉渣检查尽可能使用具有内置光源的显微镜，光线强度可调，应具备40倍、10倍的物镜和10倍的目镜。同一实验室如有多台显微镜，各显微镜的物镜及目镜的放大倍数应一致。”
同时又建议：“有条件的实验室应开展各种尿液有形成分的染色检查，配置多种类型显微镜(如相差显微镜，偏振光显微镜等)，以便于有形成分的进一步鉴别。”
20.FASTREAD 10尿沉渣定量分析板有何特点？
答：FASTREAD 10板为NCCLS和中华医学会检验分会推荐的一次性尿沉渣定量分析板。
每块板上有10个大格，即可放10个样品。每个大格的可观察体积约7μl ，其中划有刻度的计数区的总体积为的1μl 。每个计数区分为10个中格，每个中格又划分为16个小格。也就是说，1μl 体积的样品，在这里被精密地分成160个小格。
由于采用一次性定量板，所以不再需要清洗，也不用担心染色剂的玷污，省力省时无交叉污染。
定量板的价格便宜，而且不需其它试剂。
顾可梁教授通过对普通载玻片不加盖玻片法、载玻片加盖玻片法、改良Neubauer计数池法、FASTREAD 10定量板法四种方法进行比较后指出，在实验室常用的尿沉渣检查法中，以定量分析板法的变异系数小(尿沉渣镜检，上海医学检验杂志，2000；15(2)：68)。
21.尿沉渣标本染色的目的是什么？
答：相当多专家赞同尿沉渣非染色镜检，他们对尿沉渣染色的疑虑是：
- 某些染液的成分会导致溶血现象，在低比重尿中尤为明显；
- 由于大量染液的加入而引起稀释比的计算误差。
应当指出在大多数情况下尿沉渣非染色镜检足以胜任，然而有些情况下，染色的优点将很有帮助。选择合适的染色方法可减小发生溶血的几率。至于染液稀释标本而引起的误差可从技术上予以改进。
尿沉渣染色的目的主要是：
- 防止尿沉渣标本中主要成分在镜检时遗漏和误认；
- 便于确定某些特殊成分(如脂肪球等)；
- 判断难辨别的尿沉渣成分(如半透明的上皮细胞等)或异形细胞等；
- 制备临床或科研所需性标本。
22.如何进行尿沉渣标本染色？
答：建议尿沉渣临床检验采用以下步骤，以避免染液对尿沉渣标本的稀释作用：
- 在标准定量分析池中进行非染色定量计数；
- 对于有疑问的标本，可进一步染色分型，可在玻片上观察。
如果要提高分辨率，采用位相差显微镜是一种明智的选择。而偏振光显微镜对尿中脂肪和结晶的鉴别也很有帮助。
对于采用一次性FASTREAD板的用户当然可以直接在定量池中测量染色标本，操作简单方便。
23.有哪些常用尿沉渣标本染色方法？
答：常用的尿沉渣染色方法有湿片染色（活体染色、超活体染色）和固定染色（组织化学染色、荧光染色和免疫化学特定成分染色）两类。
不同的染色方法有助于不同的检测目的，有时它们往往是互补的。
在大部分场合，采用SM(Sternheimer-Malbin)或S(Sternheimer)活体染色已能解决问题。
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