特殊的蛋白分子量标准是什么?

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2012-06-19点击量:

特殊的分子量标准一般而言就是修饰标记蛋白分子量标准吗通常来将,它们都是western blot专用的蛋白分子量标准。下面是关于这类特殊蛋白分子量标准的介绍:
①生物素标记蛋白标准
  未染色的Marker在做Western时,需要在印迹前先用丽春红或者是SYPRO荧光蛋白染色液等不干扰Western Blot的染色方法显色,在胶上做标记后才能“拼”在后的结果中,如果是预染的Marker就要在转膜后标记膜,或者剪膜,后在“拼上”。要是想直接将Marker结果显示在后结果上,不用手工作图或者拼接,那就要Western专用的Marker了。比如生物素标记的蛋白标准。这种方法主要是配合化学发光法:在蛋白分子量上标记生物素,通过带有抗生物素的抗体或者偶联链亲霉素的抗体,在化学发光检测到目的蛋白带时就可以同时看到相应的分子量标准一起发光显影了。不同于普通蛋白分子量标准的便宜、预染蛋白分子量的方便,这一方法的优点是与Marker和目的蛋白对应性好,同时在同张片上显示,不用拼接,利于分析。缺点是如果样品中带有生物素背景,那个抗生物素抗体有可能影响结果,而且反应体系太过复杂也会干扰实验结果。
②特殊标记蛋白标准
   在经过修饰的蛋白标准中,除了生物素标记以外,近些年由于下游蛋白操作的丰富化与复杂化,也出现带有“尾巴”的蛋白标准。比如His-Tag,如果每个Marker条带都有His –tag,那二抗添加His-Taq抗体很容易将Marker条带显示在Western结果上。很方便,问题就是有可能有潜在的干扰,比如样品中正好有类似Histag的结构。不过这可以通过对照检测的。这些经过特殊标记的蛋白Marker一般都不会影响目的蛋白的正常显色,而且和目的蛋白显色在同一张膜上,有时还可以作为阳性对照,但是各自的检测显色机制和效果又有一些区别。

蛋白分子量标准  修饰标记 生物素标记

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