核酸杂交技术早可以追索到1961年Hall等人的液相杂交[30]，40余年来取得了许多重大的突破。但对于探针的标记物而言，放射性同位素标记一直占据着主导地位，这主要是因为同位素探针的高灵敏度目前仍然是其他方法不可逾越的。
但是，它的缺点也不言而喻：除去放射性危害和环境污染外，购买困难、运输不便、频繁标记、自显影检测时间长和需特殊的防护设备等局限，使得其成本很高，普通实验室难以开展，更不可能使实验室研究成果迅速向实际应用过渡。因此，发展和完善非放射性探针，一直是核酸杂交技术研究的重要方向之一[31]。
Langer等人[32]在1981年推出了个实际意义上的非放射性探针—生物素标记探针。随后，非放射性探针的开发和应用有了长足的进展，除生物素探针外，还开发了光敏生物素标记探针、磺基化探针、2-乙酰氨基芴（AFF）探针、荧光素探针和碱性磷酸酶（AP）探针等[33]。但得到广泛应用的，除生物素标记探针外，就是地高辛探针标记和检测系统。
1988年，Dolley[34]首先将Dig-dUTP标记探针成功地应用于检测DNA结合因子，随之Martin等[34]对该标记物作了系统的研究。而德国Bvehringer C存放的探针，一年后仍然可以使用；含探针的杂交液冻存起来，使用5次杂交效果无明显改变。其费效比显然优于放射性标记探针。°Mannheim（现已并入Roche）公司将其商品化，极大的促进了Dig探针的应用。其检测原理如图1-5所示：标记探针与待测核酸退火形成互补双链，加入抗Dig抗体-碱性磷酸酶复合物与探针上的Dig分子免疫结合后，碱性磷酸酶可使其底物BCIP脱磷并聚合而变蓝，此过程中释放出的H+使NBT还原而形成紫色化合物，从而出现显色条带。杂交、抗原抗体结合及酶促反应均是特异性较强的过程，这是Dig探针特异性强的有力保证，其显色背景要低于生物素标记探针；同时，这也使得该系统的灵敏度较高，在非放射性标记探针中是较为突出的，有人认为几乎可以与同位素探针相当[25]。在我们的实验中，低至0.5fg的Dig标记探针即可出现显色斑点（注意该数值不是探针检测的灵敏度，灵敏度是对被杂交的靶分子而言，受许多其他因素影响）。除此之外，Dig标记探针还存在着以下的突出优点：探针标记方便、检测迅速；无须特殊仪器设备；标记探针可长期存放并多次杂交使用。
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