临床检测的终点法
具有不同分子结构的物质,对光谱有选择吸收的特性,吸收光谱的可在可见光区域也可在紫外或红外光区域。
若利用物质对可见光谱的选择吸收作定量分析,此时主要表现为颜色的变化,称为比色分析法;若利用物质对紫外或红外光区域的选择吸收作定量分析,称为吸收分光光度法。比色分析法和吸收分光光度法灵敏度高,选择性好,操作方便,已广泛用于临床生化分析,临床诊断试剂盒基本上都采用这二种方法。
其基本原理是被测物的吸光特性符合Lambert-Beer定律:A=abc
其中A为吸光度,a为吸光系数或消光系数;b为光径,即光线通过的溶液的厚度,与比色皿有关,c为吸光物质在溶液中的浓度。
在选定了试剂和仪器后,式中a和b是固定的,所以溶液中待测物质的浓度与溶液吸光度的变化成正比。当反应到一定时间时,吸光度不再发生变化,我们称这一点为反应终点。 在终点法实验中,用以知浓度的标准液与待测标本同时测定,通过待测样品的吸光度(A样)与标准品吸光度(A标)的比较,根据朗-比定律,可以计算出待测样品的浓度值(c样),计算公式如下: C测定 =A样品/A标准*C标准
比色分析法、吸收分光光度法
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