细胞培养原理和步骤。

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2017-06-07点击量:

(一)原理:

细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生

长,

同时也将细胞数量扩大,

须进行传代再培养。

传代培养也是一种将细胞种保

存下去的方法。

同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。

悬浮型细胞

接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。

 

(二)细胞传代培养具体操作

 

 

1

细胞:贴壁细胞

 

2

、操作步骤

 

1

)将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。

 

2)

加入

0.5-1ml 0.25

%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。

 

3)

瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的

细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入

10ml

培养液终止消化。

 

观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。

一般室温消化时间约为

1-3

分钟。

 

4)

用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞

好橡皮塞,置

37

℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

细胞培养原理:

(一)原理:细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。(二)细胞传代培养具体操作 

 

1、细胞:贴壁细胞株2、操作步骤 

1)将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 

2)加入0.5-1ml0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。 

3)瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10ml培养液终止消化。观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1-3分钟。 

4)用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞好橡皮塞,置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

 

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