食品安全——惠分仪器液相色谱仪对黄曲霉素的测定方法

中科惠分品牌馆

2018-10-18点击量:

 近年来,食品、药品、饲料等行业的安全问题受到国家的高度关注,其中真菌毒素类的检测范畴和项目也在不断增加。同时经过无数检测人多年的不懈努力,多种新技术在真菌毒素类的检测过程中得到应用,检测工作日益简洁、高效、准确,国家标准也不断更新和完善。2016年以来,按照国家标准委员会的要求,真菌毒素检测相关标准得到专家组的整合与完善,酝酿已久的黄曲霉毒素检测新国标即将出台;新的饲料卫生检验标准也通过农业部监管部门颁布实施,国家食品安全风险评估中心按照风险监测不断增加毒素检测项目,至此已经有黄曲霉毒素、展青霉素、呕吐毒素、赭曲霉素、乳制品M1毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素等毒素列入国家风险监测项目中。

 

    本法系用高效液相色谱法(附录ⅥD)侧定药材 饮片剂制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉毒B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计),除另有规定外,按下列方法测定。

    色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-乙腈-水(10:18:42)为流动相,流速每分钟0.8ml;采用柱后衍生法检测。衍生溶液为0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加人甲醇100ml使溶解,用谁稀释至1000ml制成),衍生化泵流速每挣钟0.3ml衍生化温度70℃;以荧光检测器检测,激发波长λex=360nm(或365nm),发射波长λem=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混和标准品(黄曲霉毒B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0ug/ml、0.3ug/ml、1.0ug/ml、0.3ug/ml)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为储备液。精密量取储备液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得。

    供试品溶液的制备 取供试品粉末约15g(过二号筛),精密称定,加氯化钠3g,置于均质瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000转/分钟),离心5分钟(离心速度2500转/分钟),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45um)滤过,量取续滤液20.0ml,通过免疫亲和柱(AflaT-est@P),流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用适量甲醇洗脱,收集洗脱液,置2ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀。即得。

测定法 分别精密吸取上述混和对照品溶液5ul、10ul、15ul、20ul、25ul,诸如 液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲线,另精密吸取上述供试品溶液20-25ul,注入液相色谱仪,测定峰面积,从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量,计算,即得。

 

液相色谱仪配置表(对黄曲霉素等真菌毒素的检测)

 

仪器名称

型号

数量

液相色谱输液泵

LC-2010

1台

液相色谱荧光检测器

进口

1台

液相色谱手动进样阀

7725i

1个

液相色谱柱

C18反相柱   

1根

保护柱

预柱

1根

液相色谱工作站

双通道、中文界面

1套

柱温箱


1套

溶剂过滤器


1套

超声波清洗机


1套

进样针


1支

过滤膜

有机、水系

1包

液相色谱前处理配件包


1套

其他所需配置单

光化学衍生器KRC

含(黄曲霉标准品1支,玻璃纤维滤纸1盒,黄曲霉总量免疫亲和柱1盒)

1套

泵流操作架


1套

高速均质器


1套

离心机


1台



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