BeyoRTM-MuLV反转录酶(RNaseH-),即BeyoRTM-MuLVReverseTranscriptase(RNaseHminus)是一种经过改造和优化的M-MuLV反转录酶(RNaseH-)。和普通的M-MuLV反转录酶相比,BeyoRTM-MuLV反转录酶(RNaseH-)也是一种依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶,可以以RNA或DNA为模板在引物存在的情况下完成互补DNA链的合成;但缺失了RibonucleaseH(RNaseH)酶活性,不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA。BeyoRTM-MuLV反转录酶(RNaseH-)是最常用的反转录酶之一。
特点:BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达13kb的cDNA,而普通的M-MuLV反转录酶(RNaseH-)仅能合成长达9kb的cDNA;BeyoRTM-MuLV反转录酶(RNaseH-)的最适反应温度为42-45℃并且在55℃时仍然有很高活性,可以避免普通的M-MuLV反转录酶(RNaseH-)在37℃反应时的一些不足。
用途:BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。BeyoRTM-MuLV反转录酶(RNaseH-)合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-timePCR、cDNA第二条链的合成等。BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)也可以用于DNA探针的标记,通过引物延伸(primerextention)来分析RNA,以及用于基因芯片荧光探针的标记。
来源:本BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达,表达的基因为经过突变优化的编码MoloneyMurineLeukemiaVirusreversetranscriptase的pol基因片断。
活性定义:Oneunitoftheenzymeincorporates1nmolofdTMPintoapolynucleotidefractionin10minat37℃.Enzymeactivityisassayedin50mMTris-HCl(pH8.3),6mMMgCl2,10mMDTT,40mMKCl,0.5mMdTTP,0.4MBq/ml[3H]-dTTP,0.4mMpolyA·oligo(dT)12-18。
纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶,可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。
酶储存溶液:50mMTris,pH8.3,100mMNaCl,1mMEDTA,5mMDTT,0.1%TritonX-100and50%glycerol。
ReactionBuffer(5X):250mMTris,pH8.3at25℃,250mMKCl,20mMMgCl2,50mMDTT。
失活或抑制:70℃孵育10分钟可以导致BeyoRTM-MuLV反转录酶(RNaseH-)失活;EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对BeyoRTM-MuLV反转录酶(RNaseH-)有抑制作用。
本产品中BeyoRTM-MuLV反转录酶(RNaseH-)的浓度为200U/μl,用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。