2xSYBRGreen定量PCR试剂盒


 产品概述
比对(biwriter)2×SYBRGreenPCRMasterMix是采用SYBRGreenI 嵌合荧光法进行RealTimePCR的专用试剂。含有常温下完全封闭Taq酶活性的热启动酶HSTaqDNAPolymerase,能够有效抑制低温条件下引物非特异性退火或者引物二聚体引起的非特异性扩增，提高扩增反应的特异性。本试剂经过特殊配制，采用优化配方的qPCR专用Buffer，大大提高了qPCR反应的扩增效率和检测灵敏度，可以在较宽的定量区域内得到良好的标准曲线，准确进行定量。本试剂与多数厂家的荧光定量PCR仪兼容，如AppliedBiosystems、Eppendorf、Bio-Rad和Roche等。
 
产品组成
A4004S
A4004M
2×SYBRGreenPCRMasterMix
1ml
5×1ml
 
储存条件：
本产品-20℃保存有效期至少一年，4℃可保存3个月。解冻后应充分混匀，避免产生大量气泡。避光保存。-20°C保质期两年。2-8°C保质期三个月。避免反复冻融。
 
试剂原理：
本产品利用热启动酶HSTaqDNApolymerase进行qPCR扩增反应，通过扩增产物嵌合SYBR Green I而激发的荧光信号强度进行检测。
1、PCR
PCR法是以微量DNA进行目的片段扩增的方法。通过DNA链的热变性、引物退火、
DNA聚合酶作用下引物的延伸三个步骤循环往复，可在短时间内扩增大量DNA片段。
2、荧光检出
SYBRGreenI是一种结合与小沟中的双链DNA结合染料，与双链DNA结合后，其荧光大大增强，大吸收波长约为497nm，发射波长大约为520nm。
SYBRGreenI可以与所有的双链DNA相结合，无需使用探针，即可实现检测，通用性好，且灵敏度很高。但是，由于SYBRGreenI与所有的双链DNA相结合，因此由引物二聚体、单链二级结构以及错误的扩增产物引起的假阳性会影响定量的精确性。在定量仪器检测过程中，可以通过测量升高温度后荧光的变化，由解链曲线来分析产物的均一性，从而区分产物的溶解峰温度而区分特异与非特异的产物。


 
使用方法：
反应条件
   1、两步法 


热启动：95℃10 分钟；
变性：95℃10～20秒；
退火/延伸：60℃20～60秒。
溶解曲线分析。
 
 2、三步法


热启动：95℃10 分钟；
变性：95℃10～20秒；
退火：56-64℃10～30秒
延 伸：72℃10～60秒。溶解曲线分析。
对于RocheLightCycler480，热启动时间应采用10min，ABI7500也可以采用5min热启动。
qPCR反应体系配制：
建议的模板量10～100ng（基因组DNA）或1～10ng（cDNA模板）。
试剂
20μl体系
50μl体系
终浓度
2×SYBRGreenPCRMasterMix
10μl
25μl
1×
Primer1（10μM）
0.4～2μl
1～5μl
0.2～1.0μM
Primer2（10μM）
0.4～2μl
1～5μl
0.2～1.0μM
TemplateDNA
4μl
10μl
-
ddH2O
-
-
-
Totalvolume
20μl
50μl
比对qPCR试剂合的性能与特点
?
1.比对品牌qPCR试剂盒这个产品也供应一些临床诊断产品开发的企业，在GMP车间生产，质控与性能更有保证；
2.比对品牌qPCR试剂盒使用热启动酶，不是普通TAQ酶;
3.?性能不逊于进口著名品牌的；
4.?可提供试用装，比进口便宜很多，比国产的略贵点，性价比不错的；
5.?已提供厦门大学、华侨大学及医学院等科研机构使用。
 
 
注意事项：
1、SYBRGreenPCRMasterMix经过特殊配制，采用热启动酶，具有更高特异性；
2、对于退火温度较低的引物或超过200bp长片段扩增建议采用三步法；
 3、扩增前后要使用专用的区域和移液器，戴手套操作并经常更换，PCR反应完成后切勿打开反应管。以大限度减少PCR产物对样品的污染。 
 

 
北京毕特博生物技术有限责任公司
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